熒光光譜儀又稱熒光分光光度計,是一種定性、定量分析的儀器。通過熒光光譜儀的檢測,可以獲得物質的激發光譜、發射光譜、量子產率、熒光強度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性,以及熒光的淬滅方面的信息。接下來一六儀器詳細說說熒光光譜儀。
熒光光譜儀主要包括光源、激發單色器、樣品池、熒光單色器及檢測器等主要部件。
1.光源
早期的熒光分光光度計,配有能發生很窄汞線的低壓汞燈。使用高壓汞燈,譜線被加寬,而且也存在高強度的連續帶。然而,一個完整的激發光譜的測定需一種能發射從可見到紫外范圍的較高強度的光輻射的燈。氙弧燈能適于此條件,因此,它是目前在熒光分光光度計中廣泛使用的光源。
2.單色器
單色器的作用是把光源發出的連續光譜分解成單色光,并能準確方便地“取出”所需要的某一波長的光,它是光譜儀的心臟部分。單色器主要由狹縫、色散元件和透鏡系統組成,其中色散元件是關鍵部件。色散元件是棱鏡和反射光柵或兩者的組合,它能將連續光譜色散成為單色光。
3.樣品池
熒光儀用的樣品池需用低熒光的材料制成,通常用玻璃和石英材料,形狀以方形和長方形為宜。
4.檢測器
主要有硒光電池、光電管和光電倍增管等。目前來說由于熒光的強度較弱,一般以光電倍增管作檢測器。選擇光電倍增管要考慮響應波長、靈敏度和噪聲水平等。藍敏管對蛋白質、核酸的測量適用,而紅敏管則適用于熒光染料檢測。